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印度谷螟AChE基因的克隆及序列分析开题报告

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1. 研究目的与意义

印度谷螟,别名印度谷蛾、枣蚀心虫等,属鳞翅目,斑螟科。

该害虫广泛分布于世界各地,是危害仓储物、家庭粮食制品等极重要的储粮害虫之一。

该害虫食性极广,几乎可以危害粮食、果脯、中药、中成药等所有植物性仓储物。

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2. 研究内容和预期目标

利用RT-PCR和RACE技术克隆获得印度谷螟2个AChE基因的全长序列,研究其基因全长、成熟蛋白质分子量、理论等电点等,比较这2个AChE氨基酸序列之间的同源性,再与黑腹果蝇和加州电鳐AChE的序列对比比较,最后利用蛋白质结构同源建模工具,分别以人丁酰胆碱酯酶和果蝇乙酰胆碱酯酶的蛋白晶体结构为模板,对印度谷螟2个AChE的三维结构进行同源建模,证明印度谷螟也存在2个AChE基因。

3. 国内外研究现状

目前已有多种昆虫的ache基因全序列被克隆并登陆到各种数据库中,同时也有诸多研究发现昆虫因为ache的敏感性降低而对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂产生抗性。

在许多昆虫如黑腹果蝇、家蝇中已经证实有与抗性相关的ache突变位点的存在,但也有研究发现昆虫ache基因的过量表达也会使昆虫对杀虫剂产生一定的抗药性。

另外,近年来研究发现某些昆虫具有2个不同的ache基因,并已从棉蚜、桃蚜、三代元库蚊等多种昆虫中克隆获得两个不同的ache基因的cdna全长序列。

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4. 计划与进度安排

2022.12-2022.03 大量饲养印度谷螟2022.03-2022.04 总RNA提取,第一链cDNA的合成2022.04-2022.05 PCR反应,PCR产物克隆与测序,序列分析及蛋白结构同源建模2022.05-2022.06 撰写论文

5. 参考文献

1] 仵均祥. 农业昆虫学[M]. 北京:中国农业出版社. 2002[2] 陈启宗,黄建国等. 仓库昆虫学[M]. 1986[3] 陈耀溪. 仓库害虫(增订本)[M]. 北京:中国农业出版社. 1984[4] Anthony N,Rocheleau T,Moeelin G,Lee HJ,ffreneh-Constant R.1995.Cloning,sequeneing and funetional expression of anaeetyleholinesterase gene from the yellow fever mosquito Aedes aegypti.FEBS Lett,368:461-465[5] Foumier D,Franeois K,Bride JM,Hall LM,Berge JB,Spierer P.1989.Drosophila melanogaster acetyleholinesterase gene strueture,evolution and mutation.J Mol Biol,210:15-22[6] Hall LMC,Maleom CA.1991..The acetyleholinesterase gene of Anopheles stephensi.Cell Mol Neurobiol,11:131-141[7] Hall LMC,Spierer P.1986.The Ace locus of Drosophila melanogaster::Structural gene for acetyleholinesterase with an unusual 5'''' leader.EMBO J,5:2949-2954

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