利用ph1b突变体诱导百萨偃麦草染色体6J结构变异体的研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

小麦是世界上重要的粮食作物之一，在我国，水稻和小麦并列为两大主要粮食作物。

小麦的遗传基础复杂，改良困难，随着小麦栽培的集约化和商业化品种的广泛推广，小麦种内遗传基础日趋狭窄，遗传脆弱性日益凸现，已成为小麦遗传改良、选育突破性品种的主要瓶颈[1]。

随着环境污染的加剧，土壤的次生盐渍化逐渐加重，已对农业生产构成严重威胁，又由于可耕地面积的不断减少、淡水资源的严重不足，迫使人类开发和利用大面积的盐碱地资源和含盐水源。

2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标：诱导小麦-百萨偃麦草染色体6j易位系，并利用分子细胞遗传标记进行鉴定。

2.研究内容：利用染色体6j的特异分子标记追踪含有外源染色体的植株，然后对相应单株的f4种子发芽、剪根，并进行染色体制片，应用细胞学技术鉴定涉及外源染色体6j的结构变异体。

本研究期望筛选到较多的涉及染色体6j的结构变异体，其中包含有补偿性小片段易位系。

3. 研究的方法与方案

1研究方法综合利用分子标记分析和细胞学方法鉴定染色体6j的结构变异体，具体包括dna的提取、pcr技术、page凝胶电泳、银染、染色体制片和荧光原位杂交等方法。

1.1 分子标记分析 dna提取：基因组dna提取采用sds[9]法，主要步骤如下：(1)取适量叶片放入2.0 ml离心管中，加入适量液氮，后将叶片研磨成细粉末状备用。

(2)向2.0 ml的离心管中加入等体积事先预热的dna提取液，混匀后放到65 ℃水浴锅中振荡40 min；(3)取出水浴锅中的离心管，冷却至室温，加入等体积的氯仿/异戊醇（24:1）混合液，室温振荡15 min左右；(4)室温下离心，12000 rpm，约8 min；(5)将上清液置于另一灭菌的1.5 ml新离心管中，加入1.2-1.5倍体积预冷的100%乙醇，轻摇混匀，放至于-20℃冰箱静置约20 min使dna沉淀；(6)用一次性枪头小心勾出沉淀好的dna，将其放于另一灭菌的1.5 ml新离心管中，用70%乙醇清洗2-3次；(7)用超净工作台将提取出的dna吹干，然后加入适量的te（ph=8.00），常温下，让dna充分溶解；取少量的dna母液稀释后，用酶标仪测其浓度，选取合适浓度的dna用于实验。

4. 研究创新点

(1)所用的试验材料和分子标记均为本实验室选育，同时通过分子标记辅助选择加快变异体的选育并附以细胞学确认是本研究的特色。

(2)诱导并获得携带有6J染色体小片段的系列补偿性易位系是本文的创新之一，同时利用获得的不同区段易位系亦可实现特异标记的物理区段定位。

5. 研究计划与进展

2014.10-2014.11 阅读相关文献、明确实验思路、学习实验技术2014.11-2014.12 完成分子标记筛选、利用特异分子标记对451个F3植株基因组DNA进行筛选2014.12-2015.01 整理、分析实验数据，选出可能含有易位的F3植株2015.01-2015.02 对相应F4种子进行细胞学鉴定分析