南方根结线虫分支酸变位酶基因离题RNA干扰研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

一．本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等（列出主要参考文献）

1.课题研究意义

根结线虫（meloidogyne spp.）是一类植物根系内寄生线虫，是我国经济作物的重要病原线虫，主要包括南方根结线虫（m.incognita）、花生根结线虫（m.arenaria）、爪哇根结线虫(m.javanica)和北方根结线虫(m.hapla)等4大优势种群^[1]。在我国,以南方根结线虫分布最广,危害最大。近年来,随着农业种植结构的调整,保护地作物栽培面积迅速发展,同时也为南方根结线虫的发生、发展提供了适宜的环境,使得土壤中的根结线虫得以积聚增殖,发病田的寄主常年减产15%～20%,严重时达到70%以上^[2]。尽管如此，对于这类病害目前仍然缺乏有效的防治策略，因此寻找能够有效控制根结线虫的防治手段和药物靶标已成为保障我国农业生产的重要任务之一。本研究通过体外转录合成南方根结线虫靶向分支酸变位酶基因的dsrna（double strands rna），运用浸泡的方法对mi-cm进行活体外rnai研究，初步探究了该基因在线虫侵染过程中的作用，为进一步研究其功能及筛选有效的防治靶标打下基础。

2. 研究的基本内容和问题

二．研究的目标、内容和拟解决的关键问题

1.研究目标

本研究通过在体外转录合成了南方根结线虫靶向分支酸变位酶基因的dsrna（double strands rna），运用浸泡的方法对mi-cm进行活体外rnai研究，初步探究了该基因在线虫侵染过程中的作用，为进一步研究其功能及筛选有效的防治靶标打下基础。

3. 研究的方法与方案

三．研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析

1.研究方法、技术路线及实验方案

4. 研究创新点

四．特色或创新之处

目前，我国对于根结线虫类病害仍然缺乏有效的防治策略，因此寻找控制根结线虫危害的有效防治手段和药物靶标已成为我国保障农业生产的重要任务之一。研究发现，南方根结线虫体内存在一类分支酸变位酶基因（chorismate mutase gene, Mi-cm），然而南方根结线虫分泌的分支酸变位酶在线虫寄生过程中的功能尚不明确，本研究通过在体外转录合成了靶向南方根结线虫分支酸变位酶基因的dsRNA（double strands RNA），运用浸泡的方法对Mi-cm进行活体外RNAi研究，初步探究了该基因在线虫侵染过程中的作用，为进一步研究其功能及筛选有效的防治靶标打下基础。

5. 研究计划与进展

五．研究计划及预期进展

1．2013年8月-10月 南方根结线虫的繁育

2．2013年10月 南方根结线虫卵的分离及孵化，cdna的制备，dsrna的合成