猴头菇肽的免疫调节活性研究开题报告

1. 研究目的与意义

猴头菇是一种高蛋白低脂肪富含多种营养物质的食用菌，具有多种活性物质，但是对猴头菇活性物质的研究多集中在探究其中多糖或是浸提物的活性，而蛋白质作为猴头菇中含量最多的物质，对于猴头菇蛋白肽的研究较为匮乏。

在查阅多方文献以及本实验室前期对猴头菇酶解物的免疫活性分析，均表明猴头菇蛋白肽具有一定的免疫调节活性，但是具体肽段及机理不明晰，猴头菇肽具有较大的开发潜力和研究空间。

2. 研究内容和预期目标

研究内容：

1. 分离纯化，对分子量、水解度、氨基酸组成进行分析，通过超滤联合多级色谱分离技术纯化和质谱技术筛选出优势肽。
2. 利用固相合成技术合成优势肽，通过建立小鼠巨噬细胞模型进一步从优势肽中筛选出高免疫活性的肽段。
3. 以m0型小鼠巨噬细胞典型细胞因子（no、il-1β、il-10、il-6和tnf-α）分泌水平为指标，向m1型巨噬细胞以及m2型巨噬细胞的分化，指示目标肽段的免疫调节活性。
4. 建立细胞模型验证该活性肽段的免疫调节机理。

3. 国内外研究现状

国内目前对猴头菇的活性成分研究主要集中在猴头菇多糖的活性。贾联盟等研究猴头菇子实体多糖成分，通过水提取和碱提取 2 种方法结合得到 5 种猴头菇多糖。崔芳源研究猴头菇胞外多糖 (extracellular polysaccharides, eps) 及 胞 内 多 糖 (intracellular polysaccharides,ips)的结构。

猴头菇活性蛋白质富含人体必需氨基酸。陆武祥等探究了猴头菇菌丝蛋白含量及抗氧化活性。猴头菇菌丝蛋白有极强的抗氧化活性,而且抗氧化活性要比香菇等常见菌类高,且猴头菇菌丝蛋白相比多糖有更强的抗氧化活性。徐艳等研究猴头菌液中的菌丝蛋白。结果表明,酶解后的抗氧化肽对羟基自由基、超氧阴离子自由基有很好的清除效果,可作为纯天然的抗氧化剂开发利用。

国外研究现状：

4. 计划与进度安排

1. 实验室前期对猴头菇酶解物进行活性筛选表明其具有良好的免疫活性，因此本研究拟在前期研究基础上，基于分离纯化及细胞筛选模型制备并筛选猴头菇免疫调节肽，表征活性肽化学结构。
2. 通过M0型小鼠巨噬细胞、M1型小鼠巨噬细胞、M2型小鼠巨噬细胞模型，以小鼠巨噬细胞典型细胞因子（NO、IL-1β、IL-10、IL-6和TNF-α）分泌水平为指标阐明猴头菇活性肽的免疫调节活性的作用机理。
3. 建立体外肠道模型，从细胞水平论证猴头菇免疫调节肽的功能活性，并利用分子生物学技术分析验证。

5. 参考文献

[1] 张宗蕊,马昱,李爽,等. 猴头菇的营养成分及保健制品开发研究进展[j]. 吉林医药学院学报, 2019, 40(4): 297-300.

[2] 黄越. 猴头菇抗氧化活性成分的分离纯化及结构鉴定研究[d]. 华南理工大学, 2018.