基于JAK2/STAT3通路研究鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ对 A549细胞侵袭的抑制作用开题报告

1. 研究目的与意义

肺癌是世界上病死率最高的疾病之一，据世界卫生组织最新报道，全球肺癌患者的发病率是160万/年，死亡率是140万/年，而且二者成逐年递增的趋势。肺癌发生侵袭和转移是致使患者最终死亡的首要原因.即使在早期诊断和外科手术切除癌肿后，患者亦可能在数月内复发，肺癌骨转移的发生率为50%左右。

前期研究发现鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ对肺癌细胞迁移和侵袭有明显的抑制作用，文献报导鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ主要通过抑制JAK2/STAT3信号通路抑制黑色素瘤荷瘤小鼠移植瘤的生长，提示鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ有类似通路抑制剂的作用，预实验也发现鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ能阻断磷酸化STAT3的蛋白表达，提示我们JAK2/STAT3通路可能是鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ抗肿瘤侵袭的靶点，但是相关机制还需要深入研究。本课题构建STAT3siRNA或使用工具药物(酪氨酸磷酸酶过钒酸钠，JAK抑制因子AG490)，研究其对药物抑制细胞侵袭转移的影响；采用蛋白印迹法方法检测VEGF、HIF1-α蛋白的表达；通过RT-PCR方法检测负反馈调节蛋白SHP1、SHP2、SOCS-3、PIAS-3的mRNA丰度的变化；采用计算机对接技术,预测代谢产物与关键蛋白的相互作用，寻找代谢产物在JAK2/STAT3通路中可能的作用靶点。进一步揭示JAK2/STAT3通路在NSCLC转移过程中的作用，为NSCLC治疗药物的开发提供新思路。

2. 文献综述

抑制肺癌转移的中药研究进展

吉素娴

(南京中医药大学翰林学院药学系江苏泰州225300)

3. 设计方案和技术路线

1.1对负反馈调节蛋白shp1、shp2、socs-3、pias-3mrna的表达的影响

1.1.1药物干预后，提取细胞rna和蛋白

1.1.2通过rt-pcr方法检测负反馈调节蛋白shp1、shp2、socs-3、pias-3的mrna丰度的变化

4. 工作计划

2015.1～2015.3查阅文献，确定研究方案

2015.3～2015.4研究对shp1、shp2、socs-3、pias-3mrna的表达的影响

2015.4～2015.5构建stat3sirna或使用工具药物(酪氨酸磷酸酶过钒酸钠，jak抑制因子ag490)，研究其对药物抑制细胞侵袭转移的影响

5. 难点与创新点

本课题作为新药研究的一部分，具有较强的理论及实践意义，其系统性较强。要求实验人员熟悉WesternBlot、SDS－PAGE电泳方法，掌握计算机对接技术和逆转录-PCR技术。本课题从定性半定量两个方面出发，针对淫羊藿总黄酮的主要代谢产物之一鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ，建立了模拟小分子化合物和蛋白的正向对接，推测代谢产物在通路上可能的作用靶点。为NSCLC治疗药物的开发提供新思路，具有较好的实践意义。