生长激素的纯化工艺研究开题报告

1. 研究目的与意义

内容:本次对rhgh纯化工艺的研究，包括实验室研究及中试放大。

在实验室研究中系统地比较了不同层析方法、缓冲体系统、离子强度等，确定了基本的纯化路线。

然后在此基础上进行了一系列中试优化，最后确定了整个纯化工艺流程，产品纯度可达95%以上，内毒素、热原等指标检测合格。

2. 文献综述

文献综述大肠杆菌与酵母表达重组人生长激素的纯化工艺比较【摘要】国内目前重组人生长激素大多利用大肠杆菌生产，但大肠杆菌属低等原核生物，无法对蛋白质进行翻译后的加工修饰，分离纯化工艺复杂，产品得率低。

我们使用毕赤酵母作为低等真核生物，具有高效分泌表达的特点，毕赤酵母表达系统高效表达人生长激素，为rhgh 的开发打下基础。

再利用亲和等层析技术可用来从体液、组织抽提液、细胞培养液中,特别是从基因工程菌体破碎液等复杂组成物中分离出微量蛋白质和多肽。

3. 设计方案和技术路线

1、 通过超滤预处理去除发酵上清大颗粒物质，超滤降低电导和交换缓冲液过程中使用的所有溶液在使用前都需先4℃预冷。

2、5.0cm50cm 层析柱q sepharose ff层析捕获hgh洗脱目的蛋白同时除去部分杂质。

3、5.5cm30cm层析柱phenyl sepharose ff层析去除色素及一些蛋白杂质。

4. 工作计划

2022年3月1-13号：查阅rhGH相关资料撰写开题报告并做好相关实验准备；2022年3月14号-4月30号：准备开始课题实验；2022年5月1-7号：分析相关实验数据并整理实验结果；2022年5月8-31号：查找资料，撰写论文。

5. 难点与创新点

我们采用了酵母表达体系，跟以往的大肠细胞内或分泌型表达相比，酵母表达的蛋白质都是可溶性、构象正确的产物，其表达量高、易提纯且无内毒素污染等问题，因此无需进行破菌、洗涤等复杂的分离操作，也使得纯化方案设计变得简便。

另外根据该蛋白的一些理化特性，以及纯化过程中必须确保样品的稳定性的原则，按照分离纯化中捕获、初纯、精纯 的纯化思路，对每一步进行筛选、细调和优化，最后得到一条适合可行的工艺路线。