吴茱萸碱调控线粒体自噬减轻大鼠脑缺血再灌注损伤作用及机制研究开题报告

1. 研究目的与意义

细胞自噬作为应激反应，对神经细胞存活、清除神经细胞内衰老细胞器和错误折叠蛋白等起重要作用，所以细胞自噬在脑缺血损伤中的作用得到了越来越多的研究。

其中细胞自噬在脑缺血再灌注中起到双重调节作用，是决定细胞存活还是凋亡的重要因素。

在适度缺血损伤下，上调自噬，为细胞提供能量；但是过度刺激，可能导致细胞自噬过度，发生自噬性死亡。

2. 文献综述

1. 脑缺血再灌注损伤有调查资料显示，脑血管病已经成为我国人口的第一位致残和致死性疾病，加上人口趋向老龄化，脑血管疾病的发病数量还有逐年增多的趋势，其中缺血性脑卒中病约占85%。

所以，缺血性脑血管病的预防和治疗已经成为目前临床研究的一个重要问题。

缺血性脑血管病(ischemic cerebrovascular disease， icvd)指供应大脑血流的主要动脉发生狭窄或闭塞,结果导致脑组织(特别是大脑中动脉区域)急剧缺血缺氧,最终引起局部脑组织发生缺血或坏死,出现相应的临床症状。

3. 设计方案和技术路线

选用成年雄性sd大鼠，随机分为空白对照组（control）、模型组（model）、吴茱萸碱小剂量组（50mg/kg）（evo-l）、吴茱萸碱大剂量组（100mg/kg）（evo-h）。

采用线栓法构建大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion, mcao）模型。

在再灌注24h后，检测指标包括：神经症状评分；ttc（2，3，5－三苯基氯化四氮唑）染色法计算脑梗死容积百分比；在透射电镜下动态观察神经元线粒体自噬超微结构（如自噬体和线粒体自噬溶酶体）的改变；蛋白质印迹法（western blot，wb）检测神经元mtorc1（mtor complex1，mtorc1），检测神经元线粒体结合的lc3-ii/lc3-i比值、自噬关键激酶ulk1及其新底物fundc1的蛋白表达；血清炎症因子检测白细胞介素-1β（il-1β）、白细胞介素-6（il-6）、肿瘤坏死因子α（tnf-α）的表达，通过上述指标来评价吴茱萸碱调控细胞自噬对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用。

4. 工作计划

已完成实验动物SD大鼠的给药环节，七天后将进行造模。

5. 难点与创新点

查阅文献，我们发现大多治疗脑缺血的中药来自于补益药如人参、黄芪或者来自于活血化瘀药如丹参、三七、川芎等。

而吴茱萸作为温里药，在传统上并不作为治疗脑缺血的药物，但在现代的研究中，我们发现吴茱萸有效成分吴茱萸碱等能减轻缺血再灌注小鼠的神经功能以及保护小鼠的学习记忆能力，但对其作用机制只做了简单的推测。

本文创新地选取吴茱萸碱调控线粒体自噬的角度，阐述其减轻脑缺血再灌注损伤的作用与机制。