六味地黄胶囊大孔树脂工艺研究开题报告

1. 研究目的与意义

【研究内容】

六味地黄胶囊滋阴补肾，用于肾阴亏损，腰膝酸软，头晕耳鸣，骨蒸潮热，盗汗遗精等。六味地黄胶囊是滋补肾阴的代表方,由熟地黄、山茱萸、山药、丹皮、茯苓、泽泻6味药组成,从药方的组成来看，它可以达到三阴同补（补肾阳、补肝阴、补脾阴）的效果，比如熟地黄可以补肾阴；山茱萸则是肝肾同补，通过补肝来达到补肾的目的；山药能健脾益肾，通过健脾来补后天。在制法中，用到大孔树脂洗脱，收集洗脱液，以泽泻中主要成分23-乙酰泽泻醇b为考察指标，进行上样量、洗脱剂用量、树脂重复使用次数等工艺参数研究。

大孔树脂又称全多孔树脂、聚合物吸附剂，它是一类以吸附为特点，对有机物具有浓缩、分离作用的高分子聚合物，是吸附性和筛选性相结合的多孔性高分子材料。通过物理吸附从溶液中有选择地吸附有机物质，从而达到分离纯化的目的。其理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂，对有机物选择性好，不受无机盐类及强离子、低分子化合物存在的影响，在水和有机溶剂中可吸附溶剂而膨胀。比其它天然吸附剂（或凝胶型树脂）具有较大的吸附能力、洗脱容易、机械强度高和抗污染能力强等优点。特别是其孔径和孔度大小、比表面积、极性等性能都可以人为控制调节，供任意选择，近几年来，由于大孔吸附树脂新技术的引进，使中药有效单体成分或复方中某一单体成分的指标得到提高。它具有快速、高效、方便、灵敏、选择性好等优点。因此在六味地黄胶囊制法中，可用大孔树脂洗脱，只是过程不够详细，急需优化过程，选择最佳工艺。

2. 文献综述

六味地黄胶囊由熟地黄、牡丹皮、山药、山茱萸、泽泻和茯苓六味药材组成，具有滋阴补肾之功,临床用于肾阴亏损,头晕耳鸣,腰膝酸软,骨蒸潮热,盗汗遗精,消渴。其中泽泻来源于泽泻科植物泽泻的干燥块茎[1]，具有清热、利尿的功效。用于小便不利、水肿胀满、泄泻尿少、痰饮眩晕、热淋涩痛、高血脂症，是一种临床应用非常广泛的中药[2]。泽泻的化学成分以三萜类成分为主，其中萜醇类化合物具有降血脂[3]和保肝[4]的作用。本实验采用D-101型大孔树脂对六味地黄胶囊中的三萜类成分进行分离纯化，以23-乙酰泽泻醇B为指标，确定上样量、洗脱剂用量以及大孔树脂重复使用次数等等。

大孔吸附树脂是一类不含交换基团且具有大孔结构的有机高聚物吸附剂,它能从中药及复方中有选择性地吸附其中的有效成分,而用于有效成分及有效部位的分离纯化[5-7]。因此，随着中药现代化的不断深入和中药新药研发的发展,大孔吸附树脂已广泛应用于中药及天然药物提取液中有效成分的富集和纯化[8-10]。

一、六味地黄胶囊

1、处方熟地黄1408g酒萸肉704g

牡丹皮528g 山药704g

茯苓528g 泽泻528g

2、制法以上六味，取茯苓110g粉碎成细粉，筛去部分与剩余茯苓加水煎煮三次，每次30分钟，滤过，滤液合并，浓缩至稠膏状；酒萸肉加乙醇回流提取二次，每次1小时，滤过，药渣备用，滤液合并，回收乙醇，浓缩至稠膏状。牡丹皮用水蒸汽蒸馏，并在收集的蒸馏水中加入1mol/L盐酸溶液使结晶，滤过，结晶用水洗涤，低温干燥，研成细粉；蒸馏后的水溶液及牡丹皮药渣、酒萸肉药渣与其余熟地黄等三味加水煎煮三次，每次1小时，滤过，滤液合并，通过大孔吸附树脂，用70%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩至稠膏状，加入上述茯苓稠膏、酒萸肉稠膏及茯苓细粉，混合，减压干燥，粉碎成细粉，加入上述牡丹皮提取物细粉与适量辅料，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得[规格（1）]。

以上六味，取茯苓350g粉碎成细粉；酒萸肉加乙醇回流提取二次，每次1小时，滤过，药渣备用，滤液合并，回收乙醇，浓缩至稠膏状；牡丹皮用水蒸气蒸馏，蒸馏液加入1mol/L盐酸溶液使结晶，备用；蒸馏后的水溶液及牡丹皮药渣、酒萸肉药渣、剩余茯苓与其余熟地黄等三味加水煎煮三次，每次1小时,滤过，滤液合并，浓缩至稠膏状；加入上述茯苓细粉及酒萸肉稠膏，混匀，低温干燥，粉碎成细粉，加入上述牡丹皮提取物和适量辅料，混匀，装入胶囊，制成2000粒，即得[规格（2）][11]。

3、含量测定

3、1对照品溶液的制备

取23-乙酰泽泻醇B对照品适量，精密称定，用乙腈溶解，配置成0.1mg/ml的对照品溶液，即得。

3、2样品溶液的制备

取收集的洗脱液1ml，加50%甲醇稀释至刻度，即得。

一、大孔吸附树脂

1、大孔吸附树脂预处理

称取D-101型大孔吸附树脂适量，95％乙醇润湿，填充至2.5cm15cm的层析柱中，浸泡过夜，95％乙醇洗脱至洗脱液与蒸馏水体积（1∶5，V/V）混合不产生浑浊，用水洗脱至无醇味，备用。

2、工艺条件考察与方法优化

2、1上样量考察

取处理好的D101大孔吸附树脂50g，湿法装柱；泽泻生药含量为0.5g/ml的提取浓缩液，缓慢加入到大孔吸附树脂上，以3BV/H速度分段收集流出液，每段收集100ml，检测每段流出液中23-乙酰泽泻醇B含量，当流出液中23-乙酰泽泻醇B含量达到上样液中23-乙酰泽泻醇B含量的20%时，停止收集流出液，计算流出液量，即为上样量。结果见表1:

表1:上样液量

2、2洗脱剂用量考察

将上述吸附饱和的树脂柱加70%乙醇洗脱，分段收集洗脱液，每段收集100ml，检测洗脱液23-乙酰泽泻醇B含量，当23-乙酰泽泻醇B含量达到80%，停止洗脱，此时的洗脱剂总量即为洗脱剂用量。结果见表2:

表2:洗脱剂用量

3、树脂柱重复使用研究

3、1树脂柱的准备

取经过预处理的D101大孔吸附树脂，湿法装柱，装柱体积为100ml，径高比为1：5，水洗备用。

3、2供试品制备

取四分之一处方量的药材，照六味地黄胶囊生产工艺制备上树脂柱处理的药液，添加水量至泽泻药材量的30倍（3096ml），高速离心，取上清液作供试品溶液。

3、3树脂柱吸附容量测定

取供试品溶液300ml（相当于泽泻药材10g），通过吸附树脂柱，流速为5ml/min，待吸附完后，用水洗至流出液无色，用300ml70%乙醇洗脱，流速为5ml/min，收集洗脱液300ml，测定23-乙酰泽泻醇B含量。重复上述操作12次，计算每次吸附洗脱收率，结果如下:

4、树脂柱再生过程

经上述吸附洗脱过程12次的树脂柱，用水洗至无色，进行再生处理。先用0.1mol/LNaOH溶液300ml洗涤，再用0.1mol/mlHCl溶液300ml洗涤，继用0.1mol/mlHCl乙醇溶液300ml洗涤，最后用水洗至中性即可。

本实验研究六味地黄胶囊大孔吸附树脂处理工艺，使大孔吸附树脂应用于工业生产中，便于大量生产六味地黄胶囊。

参考文献

［1］国家药典委员会．中华人民共和国药典:2010年版一部［M］．北京:中国医药科技出版社，2010:212．

［2］吴水生．泽泻的药学与临床研究［M］．北京:中国中医药出版社，2006:161．

［3］YAMAHARAJ，KOBAYSHIG，IWAMOTOM，etal．TheeffectofalismolisolatedfromAlismatisRhizomaonexperimentalhypertensivemodelsinrats［J］．PhytRes，1989，3(2):57．

［4］TADAKAZUM，YOSHIOI，TAKEOH，etal．BiologicalactivetriterpenesofAlismatisRhizoma．Ⅰ．1）IsolationoftheAlisols［J］．ChemPharmBull，1970，18(7):1347．

［5］李文兰,范玉奇,季宇彬,等.大孔吸附树脂对川芎中阿魏酸及总酚酸的分离纯化[J].中国新药杂志,2007,16(9):701-705.

［6］李文兰,王艳萍,季宇彬,等.X-5大孔树脂纯化新乌头碱和乌头总碱的研究[J].中国中药杂志,2007,32(5):396-340.

［7］张超,李文兰,南莉莉,等.均匀设计法优选八珍汤总苷类部位的提取工艺[J].哈尔滨商业大学学报:自然科学版,2009,4(25):136-138.

［8］MaZS.Theapplicationofmacroporousadsorptionresinontheresearchofmedicalsciences[J].ChinTraditPatMed(中成药),1997,19(12):40-41.

［9］ShiZQ,ShiRF,FanYG,etal.Applicationofpolymerad-sorbentinextractionofmedicalherbals[J].ChinTraditHerbDrugs(中草药),2001,32(7):660-662.

［10］TuPF,JiaCQ,ZhangHQ.TheapplicationofmacroporousdsorptionresinonnewdrugresearchandproducationofTCM[J].WorldSciTech:ModTraditChinMed(世界科学技术:中医药现代化),2004,6(3):22-28.

［11］国家药典委员会．中华人民共和国药典:2010年版一部［M］．北京:中国医药科技出版社，2010:600-601．

3. 设计方案和技术路线

研究方案：

1、含量测定

（1）对照品溶液制备：取23-乙酰泽泻醇b适量，制成0.1mg/ml的对照品溶液；

4. 工作计划

2015.2.13-2015.3.15查阅相关文献，确定研究方案；

2015.3.15-2015.4.5完成初步实验室工作；

2015.4.5-2022.5.1完成中试验证工作；

5. 难点与创新点

目前，很少见到有关六味地黄胶囊大孔吸附树脂工艺研究的相关报道，大多文章都是大孔树脂对中药单味药的影响的研究。六味地黄胶囊是药典中的品种，但在标准中没有详细的工艺参数。本课题研究摸索出六味地黄胶囊大孔树脂处理的上样浓度、吸附速度、上样量等生产工艺参数，形成完整的质量标准方案。