分子模拟指导下的分子肽SpyTag/SpyCatcher连接效率提升改造开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

一、背景介绍牛津大学的howarth mark团队在革兰氏阳性菌酿脓链球菌streptococcu spyogenes的纤连蛋白cnab2中分离了带有asp117的肽段spytag和带有lys31的肽段spycatcher。

其中，lys31能够和asp117侧链自发地进行共价结合[1-2]。

该反应能够在短时间内完成，并且不需要任何特异性酶或离子进行催化，这种异肽键一经形成很难发生逆反应[3-4]。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

一、研究内容本课题以研究提高spytag/spycatcher系统体系的连接效率以及异肽键的连接效率，拟构建突变体来对spytag及spycatcher进行改造。

进行改造后，进行蛋白质纯化并对分子肽连接效率进行验证。

需解决的问题：1.突变体的构建与突变点的确定；2.蛋白质纯化；3.连接效率的验证； 二、拟采用的研究手段：1.通过微生物培养技术，对大肠杆菌进行培养，满足实验需要，同时对培养条件的控制对大肠杆菌进行诱导；2.定点突变对spytag和spycatcher进行突变点的构建；3.进行蛋白质纯化，确保实验结果的精确性。