褪黑素对猪卵泡颗粒细胞凋亡的影响开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

（1）国内外研究概况

雌性动物卵巢上的卵泡一直处于动态变化过程。卵泡发育过程中，卵泡由原始卵泡发育成为初期卵泡、次级卵泡、三级卵泡和成熟卵泡。卵泡发育是一个以形态变化为特征的不可逆的生长过程，伴随着卵泡功能的分化。从原始卵泡到成熟卵泡，卵泡直径呈逐渐增大趋势。

颗粒细胞是卵泡内包裹卵子的细胞群体，分为壁层颗粒细胞与卵丘细胞，前者分布于卵泡壁内侧，后者包裹着卵母细胞。随着卵泡发育，颗粒细胞由单层扁平状逐渐生长成立方，由原始卵泡形成初级卵泡；随后颗粒细胞持续增殖数层形成包裹卵母细胞的细胞层，此为次级卵泡到晚期腔前卵泡阶段；而随着颗粒细胞不断增殖，颗粒细胞形成卵丘颗粒细胞和壁层颗粒细胞两类，卵泡腔形成，次级卵泡进一步发育为三级卵泡、成熟卵泡。大量颗粒细胞一直伴随着卵泡发育在卵泡中增殖、分化、凋亡，对卵泡内物质交换、信号传递和激素分泌等具有重要的调节作用，影响卵泡的发育与闭锁生理过程^[1]。颗粒细胞的增殖与分化直接影响卵泡的发育、排卵、黄体形成过程及类固醇激素分泌等功能。

2. 研究的基本内容和问题

（1）研究目标及内容

旨在研究不同浓度褪黑素处理下卵泡颗粒细胞的凋亡情况。

3. 研究的方法与方案

研究方法：

（1）颗粒细胞的分离与纯化

将采集的卵巢用灭菌的pbs冲洗干净，用剪刀卵巢上的卵泡逐个剥离，去净卵泡周围的结缔组织。将分离出的卵泡分别放入加有dpbs缓冲液的表面皿中，逐一从中间剪开，刮取卵泡内壁，用不锈钢细胞筛过滤并将滤液离心处理，得到颗粒细胞。

4. 研究创新点

目前国内外已有一些褪黑素对细胞凋亡影响的研究。但不同浓度褪黑素处理下卵泡颗粒细胞凋亡的相关研究数据还有待补充。本研究通过系统揭示猪卵泡中颗粒细胞受4种浓度褪黑素影响的凋亡状况及相关基因表达情况，试图探讨不同浓度褪黑素对颗粒细胞的凋亡情况存在的差异，为相关研究中外源褪黑素添加剂量的选择提供参考，进而为更深入了解褪黑素在猪卵泡发育与闭锁过程中的作用奠定基础。

5. 研究计划与进展

（1）研究计划

2019年11月：查阅文献、设计实验