克氏原螯虾工厂化离体育苗技术研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题意义：克氏原螯虾,(procambarus clarkii), 属于甲壳纲(crustacea)，十足目(decapoda)，鳌虾科(cabaridae)^[1] ,又称红色沼泽螯虾、小龙虾或克氏螯虾，原产于墨西哥北部和美国南部。^[2]我国小龙虾人工养殖始于1980年代，小龙虾养殖产业现已形成全国性分布，主产区在长江中下游流域的湖北、江苏、安徽等地区，其产量占全国总产量的95％。^[3]据不完全统计，2007至2017年，全国小龙虾养殖产量由约26.6万吨增加到约112.97万吨，增长约324％，全国养殖面积超过1000万亩。^[4]数据显示，2017年小龙虾经济总产值约2685亿元，全产业链从业人员已近500万人。^[5]

随着养殖规模日益扩大，人工干预性腺同步化^[6]、人工育苗生产^[7]等关键技术瓶颈已严重制约产业发展,使得克氏原螯虾的苗种供应始终不足，即克氏原螯虾虾苗的供给远远不能满足市场的需求。由于克氏原螯虾的生物学特性，具有怀卵量少、孵化率低、孵化时间不同步等缺点^[8]，这几个因素限制了虾苗的规模化生产。为了解决克氏原螯虾苗种供应的问题，许多学者从不同的方面对其进行了研究，包括从光照^[9]、水温^[10]、饵料^[11]以及隐蔽物数量^[12]等方面提高繁殖性能，但仍不能彻底改善现状，解决虾苗出苗量少的问题。正因为我国对于克氏原螯虾繁育生物学研究起步较晚，因此有效开展小龙虾繁育机制研究日益迫切。

克氏原螯虾受精卵的胚胎是在母体的腹肢上发育^[13]，故人工孵化时需精心饲养抱卵虾，科学调节水质，因而增加了亲虾的生产成本。若能将克氏原螯虾受精卵离体孵化，则可减少抱卵虾的饲养管理成本，实现低成本、高效益地培育虾苗。针对现有技术存在的问题，本实验意在，通过对克氏原螯虾胚胎工厂化离体培育应用前景进行研究以兹解决克氏原螯虾苗种短缺的问题。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：1.探究克氏原螯虾虾卵离体培育的可行性。2.探究克氏原螯虾离体培育工厂化生产的可能性。

研究内容：1.不同发育时期虾卵离体培育的出苗率和成活率。2.模拟离水和空运环境下，不同发育时期的抱卵虾和离体虾卵的出苗率和成活率。3.离体孵化后的虾苗中间培育的存活率以及体长体重。

拟解决的关键问题：1.克氏原螯虾离体培育的存活率是否达到80%以上。2.孵化的虾苗经过中间培育后能否有80%以上的存活率。3.在离水环境和空运运输环境下，抱卵虾和离体后的卵的出苗率和存活率是否会受影响。

3. 研究的方法与方案

研究方法：(1)用常规捕捞工具对抱卵亲虾进行批量捕捞和收集；(2)用灭菌生理盐水冲洗抱卵亲虾，将抱卵亲虾放在甲醛调配而成的消毒液中浸泡10分钟；(3)使用无菌容器作为苗床，用无菌镊子从亲虾腹部附肢上剥离不同时期的虾卵，放在准备好的苗床中，以灭菌淡水作为循环水源，灌入苗床中，浸没虾卵；(5)对环境因子进行调控，全程保持水源的微流动，注意水流不要过大防止冲散虾卵，及时镜检，并挑出死亡的虾卵；(6)14-21日，虾卵便孵化成仔虾。

技术路线：捕捞--灭菌清洗--消毒液浸泡--无菌镊子(梳子)剥离--放入苗床--调控水质、挑出死卵

实验方案及可行性分析：1.不同发育时期虾卵离体培育的出苗率和成活率。(1)按照虾卵不同的发育时期分为卵Ⅰ、卵Ⅱ、苗Ⅰ、苗Ⅱ、苗Ⅲ时期，每个时期三对照，每组随机取3只报卵虾，并记录体长体重和抱卵量，模拟工厂化繁育，计算出苗率和存活率。(2)按照虾卵不同的发育时期分为卵Ⅰ、卵Ⅱ、苗Ⅰ、苗Ⅱ、苗Ⅲ时期，每个时期三对照，每组随机取100粒正常发育的卵（苗），模拟实验室正常条件，计算出苗率和存活率。

2.模拟离水和空运环境下，不同发育时期的抱卵虾和离体虾卵的出苗率和成活率。(1)预实验取卵Ⅰ、卵Ⅱ、苗Ⅰ、苗Ⅱ各取12只卵抱卵虾和离体虾卵(苗)记录抱卵量并分别离水2h、4h、6h、8h……24h计算出苗率和存活率。(2)如果存活率仍旧很高，按照24h、30h、36h离水和空运运输的情况，分三组每组三对照，每组对照取1只卵Ⅰ、卵Ⅱ、苗Ⅰ、苗Ⅱ时期的抱卵虾和离体虾卵(苗)计算出苗率和存活率。3.离体孵化后的虾苗中间培育的存活率以及体长体重。离体后的虾苗按照2000/m³、3000/m³、4000/m³，分三组，三对照，放入1m³的帆布池中7天，每天随机取20只虾苗，测量体长体重，最后计算存活率。

4. 研究创新点

1.克氏原螯虾离体育苗研究少之又少，本次研究弥补了这方面的空缺，增加了许多克氏原螯虾离体培育的基础数据。

2.目前关于克氏原螯虾虾苗的培育方法主要是待虾卵孵化之后，再将亲虾和仔虾分离，之后对仔虾进行单独养殖。虾卵对抱卵亲虾的依赖性强，不可控因素多，孵化率很低。而且由于虾卵孵化时间不同步，使得仔虾发育不同步，因而导致仔虾规格不齐，干扰生产。离体育苗的方法刚好克服了仔虾发育不同步的问题。

3.胚胎离体孵化，是一种低成本、高效益培育苗种的技术，这个技术应用于虾蟹类的 繁育，不仅可以减少对抱卵虾蟹的饲养管理成本，还能减少抱卵过程中的卵掉落或者碰撞损坏几率，有助于提高孵化率。

5. 研究计划与进展

研究计划：1.10月中下旬进行抱卵虾的捕捞与收购。2.11月初进行不同发育时期虾卵离体培育的出苗率和成活率的实验预计10天至16天。3.11月中旬进行模拟离水和空运环境下，不同发育时期的抱卵虾和离体虾卵的出苗率和成活率的实验。4.11月下旬进行离体孵化后的虾苗中间培育的存活率实验。5.12-2月整理数据、查找文献并分析。6.3月-5月进行毕业论文撰写。

预期进展：1.11月初开始离体育苗出苗率和存活率实验到11月中旬得到结果。预计卵Ⅰ出苗率和存活率最低，卵Ⅱ、苗Ⅰ、苗Ⅱ、苗Ⅲ都与正常实验室条件下存活率相差不多。2.11月下旬完成模拟离水和空运环境下，不同发育时期的抱卵虾和离体虾卵的出苗率和成活率的实验。预计离水1天对于存活率可能并没多大影响。3.12月初完成中间培育实验预计2000的生长发育最快。