SLA-DRB1启动子区突变与PRRSV攻毒模型猪生长性状的关联研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

2006年暴发的猪高热病给中国养猪业造成灾难性打击，其主要病原为高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，prrsv，俗称蓝耳病毒）。近年来虽然采取了很多措施，但蓝耳病仍然是危害养猪生产的主要疾病，主要表现为仔猪的呼吸道疾病和妊娠母猪的繁殖障碍，特别是隐性感染对猪只健康及增重的影响巨大。由于蓝耳病毒的高变异性，即使弱毒活疫苗也不能很好地控制其流行，因此通过遗传选育提高猪的抗病性能已成为新的研究热点，而抗性资源和抗性基因的挖掘是抗蓝耳病猪育种的关键。已有研究表明不同猪品种之间存在prrsv抗性的差异，中国地方猪种姜曲海猪抗性显著高于定远猪，但分子机制不明。

白细胞抗原drb1（leukocyte antigen drb1，la-drb1），又名主要组织相容性抗原drb1（mhc-drb1），属于mhc ii类基因。人hla-drb（human leukocyte antigen drb）第2外显子编码区是抗原递呈中抗原肽的结合区，其近端启动子区域内含有mhc ii类基因共有的调控元件如s盒、x 盒、y盒、ccaat盒和tata盒等及相应的转录因子，它们作为一个整体、遵循严格的空间顺序保证基因的正常转录（lahiru handunnetthi，2010）^[1]。hla-drb与抗原递呈中ia分子相关的不变链（ia-associated invariant chain, ii链）、伴侣分子hla-dm及tcr一起完成抗原的递呈与识别，启动免疫反应。louis p等（1994）^[2]发现x盒中的多态性引起人hla-drb1启动子转录活性发生改变，导致裸淋巴细胞综合症。猪白细胞抗原drb1（swine leukocyte antigen drb1，sla-drb1）是hla-drb的同源基因。

mhc-drb1基因多态性与多种疾病关联。温青娜等（2010）发现哈萨克绵羊mhc-drb1基因多态性与细粒棘球蚴病遗传抗性相关^[3]。陈月娥等（2014）发现中国美利奴羊mhc-drbl基因外显子109c/t位点与布鲁氏菌病易感性相关^[4]。dunstan sj等（2014）报道hla-drb1的变异与伤寒抗性关联^[5]。souza de lima d等（2016）发现hla-drb1*04与亚马逊巴西人肺结核易感关联^[6]。liu zz等（2015）检测了贵州小香猪sla-drb1基因多态性^[7]。徐如海(2004)发现sla-drb近端调控区-146g/t位点与仔猪大肠杆菌k88ab黏附表型存在显著的关联^[8]。张冬杰等(2010)发现sla-drb1第3、4外显子bcni和mboi酶切所产生的bb型和ab型仔猪初生重显著增加^[9]。何凡（2013）发现sla-drb g.11470、11838、11997位点可不同程度影响公猪2~4月龄体重^[10]。但sla-drb1多态性与prrsv抗性的关联尚未见报道。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：

获得与prrsv抗性相关的分子标记。

研究内容：

3. 研究的方法与方案

研究方法：

[1]pcr扩增

[2]凝胶电泳

4. 研究创新点

由文献可知，MHC-DRB1基因多态性与多种疾病有所关联，但SLA-DRB1多态性是否与PRRSV抗性关联尚未见报道。因此，本实验采用PCR产物直接测序法获得88头大白姜曲海杂交猪SLA-DRB1基因启动子区突变的基因型，分析不同基因型与攻毒后4、7、11、14、21、28、35、42天体重的关联，旨在为抗蓝耳病猪育种开发候选的分子标记。该选题属于应用基础研究，对猪蓝耳病防制和中国地方猪种的保护利用有积极意义。

5. 研究计划与进展

实验总用时预计2016.11-2017.5，共7个月。

[1]选题：2016.11.1-2016.11.15

[2]进行文献和资料检索阅读：2016.11.15-2016.12.1