湖羊NR5A1核心启动子区突变位点筛选及其与产羔数的关联分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

课题意义: nr5a1(nuclear receptor subfamily 5 group a member 1),又名sf-1( steroidogenic factor-1)和ad4bp(ad4-binding protein)[1]，是核受体nr5a家族中第一个被发现的成员，也是一种重要的转录因子，与哺乳动物雌性生殖、卵泡发育、类固醇生成等关系密切[2-4]。

本研究以江苏特色的绵羊品种高繁殖力湖羊为研究对象，采用dna扩增结合测序法筛选nr5a1基因核心启动子区在湖羊群体中的snps位点并进行基因分型，分析不同基因型与湖羊产羔数的关联性，寻找与繁殖相关的遗传标记，为绵羊的遗传选育提供理论依据。

国内外研究概况： nr5a1是参与肾上腺、性腺发育、类固醇生成和生殖过程的核受体。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标： 获得与湖羊产羔数相关的nr5a1核心启动子区snps。

研究内容： 1、在湖羊群体中筛选nr5a1基因核心启动子区snps位点； 2、nr5a1基因核心启动子区不同基因型与湖羊产羔数的关联分析。

拟解决的问题： nr5a1基因核心启动子区snps的鉴定是本课题要解决的关键问题。

3. 研究的方法与方案

研究方法： 1、组织样的dna提取： 140只湖羊耳组织dna的提取采用酚/仿抽提法，te buffer 溶解后-20 ℃保存。

2、pcr扩增根据绵羊3号染色体（序列号：nc_019460.1）中nr5a1基因序列，采用 primer premier 5.0 软件设计1对特异性引物，用于筛选湖羊nr5a1核心启动子区 snps位点，引物由上海捷瑞生物技术有限公司合成。

pcr反应体系为20.0 l，含模板dna 60 ng、taq聚合酶（5 u/l）0.2 l、dntp（10 mmol/l）0.5 l、引物（100 mol/l）各0.5 l、mgc12（25 mmol/l）1.4 l和10缓冲液2.0 l，添加灭菌双蒸水至20.0 l。

4. 研究创新点

特色或创新之处首次在湖羊中进行NR5A1核心启动子区SNPs进行筛选，该结果对于解析NR5A1基因调控湖羊高繁殖力的分子机制具有非常重要的意义。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展 2016年11月初--2016年12月初：DNA提取及湖羊各胎次产羔数数据整理； 2017年2月初--2017年3月末 ：PCR扩增及SNPs筛选和分型 2017年4月初--2017年5月末：不同基因型与湖羊产羔数的关联分析，得出试验结果，撰写论文。