Torin1在DLD1细胞中诱导凋亡的作用研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

结直肠癌（colorectal cancer , crc）是人类常见的消化道肿瘤之一[1]。

正常的结直肠粘膜细胞存在着细胞凋亡现象，从腺体底部直到表面都有凋亡小体存在[2]，其中dld1细胞凋亡的机制在维持机体结直肠内环境稳态，防止细胞恶变中有十分重要的生理意义[3]。

反之dld1细胞的细胞凋亡功能失调即会显著提高crc的罹患率[4]。

2. 研究的基本内容和问题

1项目研究目标①探讨torin1在dld1细胞中诱导细胞凋亡的作用机制，对crc靶向治疗提供实验依据；②了解mtor通路和细胞凋亡的关系；③熟悉分子生物学基本操作和科研思路。

2项目研究内容①dld1细胞培养；②不同浓度torin1在dld1细胞中的作用效果；③torin1在dld1细胞中诱导细胞凋亡现象的检测；④在mrna水平上，检测torin1在dld1细胞中诱导细胞凋亡的相关蛋白的表达；⑤在蛋白水平上，检测torin1在dld1细胞中诱导细胞凋亡的相关蛋白的表达。

3.拟解决的关键问题确定torin1在dld1细胞中诱导细胞凋亡的浓度和作用机制；同时，熟悉基本的分子生物学操作和科研思路。

3. 研究的方法与方案

研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析1.研究方法本实验利用培养的dld1细胞系作为研究对象，采用hoechst33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡，同时，用mts方法观察细胞生长情况，最后用real-time pcr和western-blottin检测相关蛋白的表达。

1.1用mccoys5a培养液对dld1细胞进行培养；1.2在dld1细胞中，用torin1诱导细胞凋亡，通过hoechst33258染色和流式细胞术分析细胞凋亡；1.3用mts方法观察细胞生长；1.4用real-time pcr方法检测torin1在dld1细胞中诱导细胞凋亡的相关蛋白的表达；1.5用western-blot方法检测torin1在dld1细胞中诱导细胞凋亡的相关蛋白的表达。

2.技术路线（数据较大见附件）3.实验方案3.1 dld1细胞的培养与处理dld1细胞培养于含100μg/ml链霉素、100 u/ml青霉素和10%胎牛血清的mccoys5a培养液中，于恒温细胞培养箱37℃，co2 体积分数为5%中培养。

4. 研究创新点

特色：Torin1作为一种有效的mTORC1/2抑制剂，它对mTOR比对PI3K的选择性高1000倍。

利用torin1调控DLD1细胞凋亡具有特色，可行性。

5. 研究计划与进展

2015年5月:查阅文献，设计实验方案；2015年6月一2015年7月:培养细胞；2015年7月一2015年9月: 确定Torin1在DLD1细胞中诱导凋亡的浓度；2015年9月一2015年10月:观察细胞生长和检测细胞凋亡； 2015年10月一2016年1月: 提取总RNA， 设计相关引物，进行Real-time PCR实验,检测Torin1在DLD1细胞中诱导凋亡的相关蛋白表达；2016年3月: 提取总蛋白，进行Western-blot实验，检测Torin1在DLD1细胞中诱导凋亡的相关蛋白表达；2016年4月: 数据分析，撰写开题报告；2016年5月:撰写毕业论文。