1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
鸡球虫病是鸡的重要疾病之一，是由艾美耳属球虫球虫寄生于鸡上皮细胞内而导致的寄生虫病，可破坏鸡肠道的完整性，使消化系统出现紊乱，严重可导致雏鸡的死亡，耐过鸡也会出现生长缓慢、发育不良的症状，可对禽类养殖业造成巨大的损失，平均每年在全球可造成超过30亿美元的经济损失[1-4]。
目前，防治鸡球虫病的方法多是使用磺胺类、硝托胺（球痢灵）、泰灭净等化学合成药物，但随着药物的使用剂量不足以及过度使用等不规范操作、长期使用同一种药物等因素，球虫的耐药性明显增加，药物防治的效果逐渐降低并且禽类制品因用药存在药物残留[3-5]。有试验表明，人为感染尼日利亚南部的球虫并同时使用磺胺类等药物进行治疗，但鸡群的肠上皮依旧出现了病变特征，这表明着球虫的耐药性正逐渐加强，以往的药物治疗可能难以奏效[6]。耐药性的增强意味着以往抗球虫药将逐渐失去效力，虽然目前还有可以通过天然草药及其有效成分控制球虫病[7]，但仍应从其他方面寻求防治球虫病的方法如球虫疫苗的研制。目前球虫疫苗的研制还不甚理想，主要以获得性免疫为研究方向，固有免疫相关的研究较少，故研究固有免疫对于球虫疫苗的研制和球虫病的防治有重要作用。toll样受体（toll-like receptors, tlrs）就是动物固有免疫系统中关键的模式识别受体之一，可以通过研究tlr继而寻找新的防治球虫的方法。
tlrs在固有免疫系统中扮演重要的组成角色之一，可通过识别各种非自身物质成分，如细菌、真菌、病毒等继而激活下游信号通路，诱导身体产生炎性因子、Ⅰ型干扰素等，从而激活较强的免疫防御作用[8]。有研究表明，中低剂量的鸡艾美耳球虫卵囊感染鸡后，tlrs表达均上升，鸡固有性免疫可以对球虫感染进行抵抗；而在高剂量球虫卵囊感染时，tlrs表达水平下降，鸡固有性免疫遭到抑制[9]。中低剂量卵囊感染后tlrs表达上升的同时诱导il-12和ifn-γ的表达，寄生虫诱导的il-12可以促进ifn-γ的早期合成，ifn-γ对艾美耳球虫有抑制作用，可活化巨噬细胞直接杀灭细胞内原生动物[10]。由此可见，tlrs在鸡自身抵御鸡球虫感染中具有重要的作用，研究球虫对肠上皮细胞tlrs的影响对研究固有免疫在寄生虫感染中的作用有重要作用，同时使人为干预tlrs的表达来增强免疫力进而防治球虫病成为可能。现如今tlrs的激动剂已经在临床出现一些应用[11]，但目前并没有有关针对鸡球虫的tlrs相关药物。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：比较不同感染时间不同感染剂量情况下肠上皮tlr的表达水平
探究tlrs在机体抵御球虫感染过程中的作用
3. 研究的方法与方案
研究方法：1. 设计tlr基因的引物并通过qpcr进行验证
4. 研究创新点
目前鸡球虫的防治主要依赖于抗寄生虫药，但随着球虫的耐药性的逐渐积累，药物的效率逐渐降低。而通过研究球虫感染中TLRs的表达水平，可以了解TLRs在球虫感染中的作用，并可根据这些信息提前激活TLRs从而对球虫感染进行防治。
5. 研究计划与进展
2018.9-2018.12 查阅文献，收集资料，设计计划等
2019.1.3-2019.3.24 引物的设计及验证、卵囊的拓增、预试验
2019.3.25-2019.5.1 球虫攻虫，肠上皮细胞的提取，rna的提取与逆转录，通过qpcr获取tlr的表达水平；
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