屠宰场肉品来源的产志贺毒素大肠杆菌和产肠毒素型大肠杆菌PCR方法开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

一、研究意义

大肠杆菌是典型的革兰氏阴性杆菌，其引起的大肠杆菌病是一种常见疾病，在治疗过程中容易产生耐药性，且耐药谱广，耐药机制复杂，给畜禽养殖业预防和治疗病带来很大困难。碳青霉烯类抗生素是人医临床治疗革兰氏阴性菌多重耐药感染最重要的抗菌药物之一,鉴于碳青霉烯类抗生素在感染性疾病防治过程中的重要地位,国内外均未批准动物使用该类药物,但随着碳青霉烯类药物在人医临床中的广泛使用,碳青霉烯类耐药革兰氏阴性菌已在国内外大量岀现并广泛传播。

目前我国鸡源大肠杆菌已产生碳青霉烯耐药株，作为碳青霉烯酶的代表，ndm酶的出现，使感染的治疗雪上加霜。因此需要尽早掌握cre的耐药性特征与传播机制，并尽快采取有效措施，以遏制其暴发流行。本论文通过分离不同亚型ndm阳性的畜禽源大肠杆菌，并对其进行流行病学调查与分析。

本研究通过采集相关样品,旨在了解畜禽来源的大肠杆菌对碳青霉烯类药物耐药性的现状与流行病学特征，为进一步完善cre 的耐药机制与传播方式提供理论依据,为耐药性风险评估及有效防控提供科学依据。

2. 研究的基本内容和问题

一、研究目标

通过本课题的研究，揭示畜禽来源的不同ndm亚型传播、流行的分子特征，为防控bla-ndm基因的进一步播散提供数据支持，也为临床治疗ndm耐药菌引起的重症感染提供理论依据。

二、研究内容

进行大量的样品采集，通过通用引物分离不同型ndm阳性的大肠杆菌，并采用pcr琼脂糖凝胶电泳法对其碳青霉烯类抗生素抗性基因进行检测，从而对流行病学特征进行分析。

3. 研究的方法与方案

一、研究方法

通过在不同的畜禽养殖场、屠宰场进行样品采集，分离筛选出大肠杆菌后，通过pcr的方法对ndm基因片段进行检测，进而分离出ndm阳性样品，再通过药敏试验对其耐药图谱进行分析，根据系统发育群（phylogenetic group）分型方法，对分离的碳青霉烯类抗生素不敏感大肠杆菌进行分群鉴定，从而明确ndm基因在大肠杆菌中的流行情况。

二、技术路线及可行性分析

1、技术路线

4. 研究创新点

通过采集畜禽养殖场、屠宰场等大量不同来源的样品分离禽源耐碳青霉烯大肠杆菌，了解耐药基因NDM的传播环境。

5. 研究计划与进展

一、研究计划

2018.9—2019.1：在鸡场和屠宰场大量采样，分离β-内酰胺阳性的畜禽大肠杆菌，通过pcr—琼脂糖凝胶电泳对其耐药基因分析；通过多位点序列分析对其进行分型；根据系统发育群（phylogenetic group）分型方法，对分离的碳青霉烯类抗生素不敏感大肠杆菌进行分群鉴定。

2019.2—2019.03：整理并分析数据。

2019.4—2019.5：撰写毕业论文。