猪圆环病毒2型的细胞传代培养及全基因序列分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等（列出主要参考文献）：

（1）本课题的意义

猪圆环病毒病给养猪业造成了巨大的经济损失，引起了全世界兽医学者的普遍关注，相继进行研究。pcv2可分为pcv2a、pcv2b和pcv2c等多个个基因亚型，目前pcv2的流行基因型为pcv2b和pcv2d^[1]。本课题对已初步适应pk-15细胞的一株pcv2b毒株进行传代培养，通过普通pcr及荧光定量pcr方法对不同代次的病毒含量进行测定，以期提高病毒滴度，获得可稳定传代的pcv2b毒株，为猪圆环病毒病的防控奠定基础。

2. 研究的基本内容和问题

2.研究的目标、内容和拟解决的关键问题

（1）研究的目标

获得可在体外稳定传代的pcv2b流行毒株。

3. 研究的方法与方案

3.研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析：

（1）研究方法：

本课题涉及到的研究方法有：细胞培养、病毒接种、病毒培养、病毒dna提取、pcr检测、荧光定量pcr检测、pcv2全基因组扩增及测序以及序列分析等技术。

4. 研究创新点

4.特色或创新之处

通过在PK15细胞上连续传代，获得病毒滴度较高的PCV2b流行毒株。

5. 研究计划与进展

5.研究计划及预期进展

2018.9-2018.10：查找阅读相关文献，学习并熟练掌握细胞培养、普通pcr和荧光定量pcr的操作技术；

2018.11.-2018.12：pk-15细胞的传代培养和传代细胞的接毒，不同代次病毒dna的提取及普通pcr检测；