江苏省某屠宰场猪链球菌新荚膜基因簇菌株分离鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

猪链球菌（streptococcus suis）是猪链球菌病的主要病原，给养猪业造成重要的经济损失。此外，猪链球菌也可以感染人，造成人的发病或死亡^[1]。自20世纪50年代猪链球菌在欧洲地区首次被发现以来，目前全球都有人感染猪链球菌的病例。1998年江苏暴发的猪链球菌病导致25人感染、14人死亡，引起8万头左右的猪感染^[2]。2005年猪链球菌又在四川地区暴发，导致大批生猪死亡，并引起215人感染、38人死亡^[3]。目前在越南、泰国猪链球菌是引起成人脑膜炎主要病原，同时也是我国香港地区获得性肺炎的第三大病原。猪链球菌感染猪的主要临床症状表现为脑膜炎、急性败血症，甚至会导致突然死亡^[1]。此外，猪链球菌也可作为猪繁殖与呼吸综合征、猪传染性胸膜肺炎、猪瘟、猪圆环病毒病等疫病的并发或继发病原^[4]。

根据荚膜多糖（cps）抗原性的差异，猪链球菌可分为多种血清型以及相当数量未定型菌株。除了传统的29种血清型，近年来，发现了26种猪链球菌新的荚膜多糖相关基因簇（ncls）。2013年，潘子豪等人从患有急性仔猪脑膜炎的病猪体内分离出了新的猪链球菌菌株，通过凝集试验和多重pcr鉴定发现这种菌株和其他猪链球菌血清型均不同，确定为一种新的猪链球菌新型变异血清型（命名为chz),其具有高毒性和与动物脑膜炎相关的潜力^[5]。2015年，han zheng等调查了从健康猪分离的78个不可分型菌株中cps基因座的遗传特征发现了8个新的cps位点（ncl），命名为ncl1-8^[6]。2016年，xiongtong qiu等通过荚膜基因分型方法分析2013年至2015年间在中国分离的486株分离株的血清型特征，发现276个分离株携带属于16组的ncls，其中8种为新的ncls,命名为ncl9-16，并且开发了一种快速，经济的18重检测系统，可以同时识别当时公认的17种ncls,该系统将作为检测已知和鉴定非可分型猪链球菌分离株中的其他新cps基因座的有价值工具^[7]。2017年，han zheng等研究从加拿大的患病猪中回收的79株猪链球菌菌株发现了新ncls，命名为ncl17-20^[8]。2018年，jinhu huang等通过凝集试验和全基因组测序分析从35种不可分型的猪链球菌菌株中鉴定出6种新的ncls,命名为ncl21-26，并且开发了多重pcr分析以检测ncl21-26菌株，研究结果扩展了猪链球菌荚膜多糖基因座和猪链球菌致病特征的遗传多样性^[9]。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：

1、通过对江苏某屠宰场进行猪链球菌的分离鉴定，了解该地区猪链球菌流行情况，为该地区猪链球菌病的防控提供参考。

3. 研究的方法与方案

研究方法：

1、扁桃体样品的采集

4. 研究创新点

该研究有助于了解该地区猪链球菌流行情况，为该地区猪链球菌病的发展流行规律、制定该地区猪链球菌病的防控策略提供参考。

5. 研究计划与进展

研究计划：在江苏省某屠宰场连续采集4次猪扁桃体样品，样品处理后用选择性培养基进行细菌增殖培养，然后以看家基因谷氨酸脱氢酶基因gdh和dna修复蛋白基因recn作为猪链球菌种特异性基因进行pcr扩增，二者均为阳性的判定为猪链球菌。阳性样品进行纯化，分离出猪链球菌单菌落。采用26种ncls特异性引物对分离出的猪链球菌单菌落对进行pcr分型，鉴定ncl型菌株。所有分离鉴定出的ncl型菌株进行斑马鱼毒力试验，明确其致病情况。