南京地区禽巴氏杆菌的分离鉴定和耐药性试验开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

意义：多杀性巴氏杆菌(pm)可以引起多种畜禽疾病, 给养殖业造成巨大的经济损失。

为了系统的了解pm检测、鉴定和分型技术的发展，本课题选择了南京周边养殖户的病畜病禽，采集病料进行pm的分离培养与各种鉴定，总结高效快速的鉴定方法，并进行药敏试验，以确认该菌的敏感药，更好的防治pm引起的疾病。

国内外研究概况：血清型分型：tang等对从我国分离的233株多杀性巴氏杆菌进行血清型鉴定发现，a型菌株92株（39.5%），d型菌株128株（54.9%），b型菌株1株（0.4%）及未定型菌株12株（5.2%）。

2. 研究的基本内容和问题

目标：对待检病料进行分离纯化培养，通过镜检、接种培养、生化实验、pcr等手段与技术，鉴别诊断pm，总结规律与方法，然后通过进行药敏试验，判断其敏感药，以此作为防治该病的参考。

内容：1、病理解剖送检病畜，观察肉眼可见病理变化2、血涂片和触片染色，显微镜镜检观察3、通过采集病料，分离纯化，获得pm菌落，根据菌落特征初步判定是否为pm4、进行生化实验，根据生化实验结果进一步判定。

5、进行pcr，确定所检细菌为pm及其基因型。

3. 研究的方法与方案

研究方法与实验方案：1.病料剖检与采集：将各地养殖户送来的病禽进行剖检，观察其脏器病理变化是否符合pm病典型特征（禽霍乱等），并去疑似pm病感染的病禽脏器（肺、肝等）进行采集，于玻片上做触片，后冷藏保存。

2.分离纯化:将病料接种于加血清和nad的tsa培养基, 置于5%的二氧化碳培养箱, 37 c培养过夜, 挑取圆形、透明、直径1 ~ 2 mm的灰白色可疑菌落。

取上述菌落抹片革兰氏染色后在显微镜下观察, 挑取革兰氏阴性球杆菌或短杆菌菌落于tsa平皿纯化。

4. 研究创新点

创新之处：通过多次的分离培养与药敏试验，改进现有的鉴定技术，完善总结规律与经验教训，并通过大量药敏试验分析数据，整理可用的敏感药物，为养殖及科研人员今后的鉴别鉴定与防治工作提供帮助与新的思路，力求高效快捷的检测Pm及Pm所致传染病的诊断与防治。

5. 研究计划与进展

2016.11.10～11.15:病料的采集，病理剖检11.15～11.20:病料做触片及涂片，染色镜检，初步观察11.20～11.25:病料接种分离纯化，得到细菌，接种生化管进行生化实验11.25～12.10:Pcr鉴定12.10～12.20:进行药敏试验，记录敏感药物12.20:返校，整理数据，撰写论文