大豆疫霉中G蛋白α亚基的互作蛋白的筛选开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

大豆疫霉（phytophthora sojae）是一种非常重要的植物病原菌，由其侵染大豆引起的疫霉根腐病是大豆生产中的毁灭性病害之一。

在大豆疫霉侵染大豆根部的过程中，游动孢子通过识别根部分泌的异黄酮等物质，定向游动并休止，最终成功侵染大豆根部。

　　　g蛋白信号途径在真核生物中广泛存在并且非常保守。

2. 研究的基本内容和问题

PsGPA1基因作为G蛋白信号途径的重要部分参与调控了大豆疫霉游动孢子行为，但具体信号途径及调控方式仍是未知的，我们预期通过大豆疫霉体内CO-IP的方法获得与G蛋白α亚基互作的候选蛋白,寻找更多的Gα的下游的信号分子，来解释Gα是通过哪些途径来调控趋化性、进而控制致病性。

　　　拟解决的关键问题：获得PsGPA1 -3*Flag融合蛋白的大豆疫霉菌株，进行体内互作的实验。

3. 研究的方法与方案

研究方法　　　1.根据psgpa1 基因序列进行设计上、下游引物，以大豆疫霉菌菌株 p6497 的cdna为模板，用pcr扩增出相应的 dna 片段，用overlap pcr的方法在psgpa1 c端连接3*flag。

酶切片段并连接ptor载体测序验证。

　　　3. 获得测序正确的质粒，再利用peg介导的化学转化方法进行稳定转化疫霉菌株野生型p6497。

4. 研究创新点

利用CO-IP技术进行体内的Gα的互作蛋白的筛选工作，蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响，结果更为可靠。

5. 研究计划与进展

2013年07月上旬2013年08月上旬：设计引物，构建测序正确的ptor- psgpa1 质粒。

　　　2013年08月中旬2013年9月下旬：利用peg介导的方法进行稳定转化疫霉菌株野生型p6497，挑取并培养转化子。

　　　2013年9月上旬2013年10月下旬：基因组验证转化子中目的基因的插入，western 检测转化子的psgpa1 的蛋白表达情况。