利用大肠杆菌胞苷激酶高效催化胞苷生产胞苷酸开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

核苷酸在医疗、工业、农业和日用品中有着重要的应用。

5-尿苷酸(5-ump) 是合成糖类物质原料，5-胞苷酸(5-cmp)是生物合成脂质的关键中间体。

5-ump还是是生产尿苷5-utp的原料[1]。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

1、主要研究内容（1）筛选出胞苷至胞苷酸途径关键基因，并构建相关质粒；（2）重组大肠杆菌的表达及培养条件的优化；（3）利用crispr-cas9技术敲除生成途径中副产物尿苷酸相关基因；（4）最优条件下酶法生产胞苷酸。

2、研究手段2.1关键技术：ncbi基因数据库的使用、基因工程重组大肠杆菌表达、crispr-cas9敲除技术、各种表征手段（hplc、gc-ms等）。

2.2拟采取的研究方法（1）本论文拟将在大肠杆菌bl21(de3)中构建过表达胞苷激酶（uck编码），构建重组大肠杆菌生产胞苷酸；（2）在此基础上，为了提高胞苷激酶的表达，对其培养条件进行优化；（3）通过crispr-cas9敲除敲除途径中副产物基因cdd，最终在最优条件下酶法生产胞苷酸。