铜绿假单胞菌c-di-GMP水解酶基因PA2567体内与体外功能验证开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

文献综述1.引言生物被膜(biofilm,bf)是细菌为适应自 然环境,在生长过程中附着于固体表面而 形成的特殊存在形式,是由多细菌组成的 膜状结构,而并非单一细菌的膜成分。

细菌 生物被膜的生存方式不仅可以保护其中的 细菌抵抗临床抗生素和工业设施中杀菌剂 的作用,而且还可以对抗人体的免疫清除 作用,对人类的健康造成了很大的危害,从 而导致严重的临床问题 。

铜绿假单胞菌 ()是医院内感 染最常见的细菌之一,其生物被膜形成常 给临床治疗带来许多困难。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

1. 本课题的研究目的第二信使环鸟嘌呤二磷酸（第二信使c-di-gmp）的浓度与铜绿假单胞菌的生长模式密切相关，而磷酸二酯酶（pde）是一类通过降解第二信使c-di-gmp进而调控其浓度的关键酶。

本课题基于第二信使c-di-gmp调控相关基因缺陷型突变菌株文库，选取关键磷酸二酯酶基因pa2567作为研究对象，通过基因敲除和质粒过表等技术手段考察基因pa2567的生理功能及其对菌株生长模式转化的潜在影响。

2.拟采用的研究手段（1）运用聚合酶链式反应（pcr）和重叠延伸pcr技术获取目的基因片段；（2）构建基于自杀质粒平台的基因pa2567敲除质粒，选择合适的转化方式构建重组菌株并进行目标缺陷型菌株筛选，后续对缺陷型菌株进行生理特性表征，考察基因功能；（3）构建基于表达质粒平台的pa2567表达载体，分别转入野生型和缺陷型菌株进行生理特性表征，验证基因功能；基于实验结果进行分析讨论，推测基因pa2567在铜绿假单胞菌生长模式转化过程中的作用。