基于内质网应激介导的凋亡研究梓醇减轻雷公藤甲素肝毒性的机制开题报告

1. 研究目的与意义

研究内容：本研究通过细胞实验，从内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ers)介导肝细胞凋亡的角度，研究配伍梓醇(catalpol,cat)减轻雷公藤甲素(triptolide,tp)肝毒性的机制。

实验选用能表达正常肝细胞相关功能的heparg人肝癌细胞，通过检测内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 kd，grp78)、内质网应激相关蛋白双链rna活化蛋白激酶pkr样内质网激酶(er reside protein kinase,perk)、激活转录因子(activating transcription factor 6,atf6) 和需肌醇酶-1(inositol-requiring enzyme-1,ire-1)及内质网应激介导凋亡相关蛋白生长停滞及dna损伤基因(chop)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(caspase-12)的表达，研究tp及配伍cat后对肝细胞ers和凋亡的影响。

研究意义：雷公藤属卫矛科一年生藤本植物，具有活血化瘀、清热解毒、消肿散结、杀虫止血等功效，药理活性广泛，具有有抗炎、抗肿瘤、抗生育及免疫调节等作用，但有大毒，不良反应强且高发，涉及多器官系统，其中最突出的是对消化系统如肝、胃肠道等的毒性作用，限制了其临床应用。中医临床通过复方配伍可以有效减制约雷公藤毒性，起到减毒增效的作用。

2. 文献综述

内质网应激介导的凋亡与雷公藤肝毒性研究进展

马玉妍^1,2

(1.南京中医药大学翰林学院，江苏 泰州 225300；2.南京中医药大学，江苏 南京 210000)

3. 设计方案和技术路线

一、研究方案：

1.tp所致肝细胞毒性及配伍cat减毒效应研究

1.1 采用heparg人肝癌细胞模型，分为空白对照组、溶剂对照组、tp组、tp cat组和cat组。

4. 工作计划

2022年1月：查阅资料，选题。

2022年2月：确定课题，查找学习课题相关文献资料。

2022年3月：完成tp所致肝细胞毒性及配伍cat减毒效应研究。

5. 难点与创新点

1.ERS通路为近年来新发现的凋亡通路，为肝细胞凋亡研究提供了新的途径。目前关于TP肝毒性的研究多从线粒体、死亡受体介导的细胞凋亡等方面分析，鲜见从ERS介导肝细胞凋亡的角度研究TP对肝细胞的毒性。

2.HepaRG细胞是从慢性丙型肝炎病毒感染的肝癌患者体内非瘤组织分离而得的细胞株，能表现人肝细胞的大多数功能，包括药物代谢所涉及的主要CYP酶系,在体外研究药物代谢和毒性机制中发挥作用。本研究采用HepaRG细胞，更能够间接反应TP 对正常肝细胞的毒性机制。