基于炎症免疫角度研究四味藏木香汤散抗急性肺损伤的作用机制开题报告

1. 研究目的与意义

一．内容本研究以大鼠为实验对象，建立肺炎症模型，探讨四味藏木香汤散在内毒素(革兰阴性菌细胞壁的脂多糖成分)所致的大鼠肺炎症中的作用。

分析tnf-α、il-6、il-10、mcp-1、rantes水平的变化和影响，从而来验证四味藏木香汤治疗急性肺损伤的疗效，为中医治疗急性肺损伤提供一定的科学依据。

本实验分为整体实验和离体实验，整体实验内容：将内毒素（lps）腹腔注射入大鼠，3h后处死大鼠，取大鼠腹主动脉构建内毒素炎症动物模型。

2. 文献综述

趋化因子在lps急性肺损伤中的作用薛成静摘要：急性肺损伤(acute lung injury，ali)是由一系列局部或全身因素造成的肺实质弥漫性损伤，临床特征为非心源性肺水肿、严重低氧血症和肺顺应性下降。

目前已经积累了大量的肺损伤生理和细胞方面的资料，但是发病机理依然不清。

急性肺损伤发病机制复杂,病死率高,是临床常见的呼吸系统急危重症，其特征为起病急骤、发展迅速、病情凶险顽固、治疗棘手困难、预后差、死亡率高。

3. 设计方案和技术路线

一、研究方案：整体实验内容：1、选健康大鼠20 只，随机分为正常对照组、lps 感染阳性对照组、四味藏木香汤散用药组、地塞米松组4组，每组5只；2、药物提取：取四味藏木香汤散(藏木香在成药中所占的比例约为22% )样品，过三号筛，精密称定210 g，精密加入乙酸乙酯30 ml，超声处理30min，取出，放冷至室温后，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；3、造模与给药：正常对照组，对大鼠进行腹腔注射0.5ml/每只的生理盐水，给予大鼠正常饮食；lps感染阳性对照组，对大鼠进行腹腔注射20μg/kg lps，给予大鼠正常饮食；四味藏木香汤散用药组，对大鼠进行腹腔注射 20μg/kg lps，约1h后给予药物处理，给予大鼠正常饮食；地塞米松用药对照组，对大鼠进行腹腔注射20μg/kg lps，约1h后给予40μg/kgd药物处理，给予大鼠正常饮食；4、取材：sd 大鼠末次给药后， 腹腔注射0.3 mg/kg 水合氯醛，待麻醉生效后，腹主动脉取血6~ 8 ml，离心后留取血清置-70℃保存；5、检测：运用elisa法检测血清中主要炎症细胞因子tnf-α、il-6、il-10、mcp-1、rantes的含量，按试剂盒说明书要求操作；6、数据分析，得出结论。

离体实验内容：构建内毒素炎症细胞模型，将四味藏木香汤散作用于该模型。

正常对照组，不用lps处理，用正常rpmi1640 培养液培养48h；lps阳性对照组，用10μg/mllps 刺激24h后，只加入含dmso(浓度<0.5%)的rpmi1640培养液继续孵育24 h；四味藏木香汤散用药组，用10μg/mllps="" 刺激24h后，加入1.5ng/ml、5ng/ml、15ng/ml浓度的药物继续孵育24="" h；地塞米松对照组，用10μg/mllps="" 刺激24hl后，加入1.5ng/ml、5ng/ml、15ng/ml浓度的药物继续孵育24="" h，将培养皿中的液体全部转入离心管内，1000g="" 离心="" 20min，取上清液，分装小瓶-80℃贮存，避免反复冻融，抽取50μl上清液进行酶联免疫吸附法（elisa）检测。

4. 工作计划

2022.01.0501.30: 制定方案，购买实验材料； 2022.01.3002.15: 阅读相关文献及翻译；2022.02.1503.09: 完成文献综述、开题报告；2022.03.0903.25: 开题答辩；2022.03.2504.15: 进行预实验、确定实验条件；2022.04.1505.05: 进行正式实验研究；2022.05.0505.20: 撰写论文；2022.05.2006.01: 整理毕业设计、打印文档、答辩。

5. 难点与创新点

四味藏木香汤散最早可在《月王药诊》和《四部医典》中追溯到，是一种藏成汤散，迄今为止已有一千多年应用历史。

由悬钩木、藏木香、宽筋藤、干姜按2：1：1：0.5比例构成。

藏木香为君药，经现代化学分析表明异土木香内酯为其主要的有效成分，能够镇痛、消食、和胃，能明显的抑制须廯毛菌和大小胞菌活性，抗结核杆菌与其他微生物的效用；悬钩木与宽筋藤配伍使用具有抗菌等作用；干姜能抗血栓及血小板聚集，对心血管，肾上腺皮质功能等均有影响。