1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
一、本课题的意义
卵母细胞发育是雌性生殖过程的极为重要的环节之一,对卵母细胞的研究也是胚胎工程中极为重要的课题之一。当卵母细胞在各种异常情况下导致上述成熟过程无法正常进行时,卵母细胞不能正常成熟,以至于无法成功受精。卵母细胞质量低下会导致女性不孕、自发性流产或出生时婴儿有生理缺陷等严重的生殖疾病。在畜牧行业,得到质量优良的成熟卵母细胞是细胞的体外受精和形成遗传发育潜能高的胚胎的重要前提。随着科研人员深入研究调控卵母细胞发育的分子机制,我们可以在提高家畜繁殖率和增加畜牧业经济效益上做出较大的贡献,并且可以进一步的研究如何改善人类生殖健康状况,为人类的遗传发展做出贡献。本课题旨在通过一些细胞生物学方法来初步鉴定asb7在小鼠卵母细胞成熟中的作用,探索该基因对卵子质量的影响。
二、国内外的研究进展
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标
1、用asb7特异sirna(small interfering rna)抑制asb7水平,观察抑制asb7基因的表达后小鼠卵母细胞减数分裂进程的变化。
2、利用免疫荧光染色等技术观察实验组卵母细胞减数分裂成熟进程的影响,及对减数分裂成熟装置(如染色体、纺锤体等)的影响,进而探讨asb7在小鼠卵母细胞成熟中的作用。
3. 研究的方法与方案
研究方法
1、取6-8周发育完全的小鼠gv期卵母细胞,在培养液中培养0h(gv期)、3h(gvbd)、7h(mi)、9h(ai-ti)、14h(mii),观察asb7在小鼠卵母细胞发育过程中的定位。
2、取6-8周发育完全的小鼠gv期卵母细胞,体外敲低asb7蛋白,在培养液中培养3h,统计gvbd率,培养14h,统计第一极体排出率,观察卵母细胞成熟状况。
4. 研究创新点
特色或创新之处
ASB基因家族是最大的SOCS盒蛋白家族,但对于ASB7的作用机制还在探索进程中。本课题从ASB7泛素化机制方面,首次通过ASB7在小鼠卵母细胞减数分裂过程中的作用,探讨卵母细胞的减数分裂调控机制。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展
2019年9月至2019年12月:熟练掌握小鼠卵母细胞的采集以及体外成熟培养,免疫荧光染色及激光共聚焦显微镜的使用等操作技术。
2020年3月至2020年4月:完成全部主体实验。2020年4月至2020年5月:本科生毕业论文撰写,并准备答辩等相关事宜。
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