环磷酰胺对小鼠附睾结构与功能的影响开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

课题意义：环磷酰胺是一种细胞毒性化疗药物，同时属于烷化剂类免疫抑制剂，可破坏dna的结构，阻断复制，从而导致细胞死亡，是目前广泛用于治疗恶性肿瘤的药物，但环磷酰胺可导致部分患者生育力丧失。本实验旨在将环磷酰胺腹腔注射造炎症动物模型，探讨环磷酰胺对附睾形态结构及精子活性的影响。

国内外研究现状：国内外对该方面的研究较多，且探究一些药物对环磷酰胺诱导的生殖系统损伤的保护作用。

伍欢^[1]等对雄性小鼠进行腹腔注射环磷酰胺40mg/kg，连续注射7d，然后停止注射常规饲养，35d后称小鼠体重并收集睾丸和附睾，发现环磷酰胺组小鼠体重显著降低，但是睾丸指数和附睾指数不变；精子的畸形率显著上升而精子密度和活力不变；睾丸标志酶：实验组乳酸脱氢酶与对照组比显著降低，但是γ、-谷氨酰转肽酶显著升高。

2. 研究的基本内容和问题

实验目的：机体生殖系统能够调节生命体多种生理功能，因此保证其正常的生理活动十分重要。男性的生殖系统包括成对的睾丸、附睾、输精管、副性腺及单一的尿生殖道、阴茎等器官。其主要功能是产生、储存、运输精子。精子以及精液的生物学破坏直接导致男性不育的危害。通过环磷酰胺腹腔注射造炎症动物模型，探讨环磷酰胺对附睾及精子的影响。

实验内容和你解决关键问题：观察对比实验组小鼠及空白对照组小鼠临床表现、生长影响，并通过精子密度和活率、精子凋亡状态、组织形态学、免疫组化等方法检测，研究环磷酰胺对雄性小鼠附睾及精子的影响。

3. 研究的方法与方案

将20只8~9周龄spf级icr雄性小鼠随机分成2组：空白对照组（cg）和模型组（mg）。模型组小鼠腹腔注射环磷酰胺50mg/kg，连续注射7天，7天后停止注射并进行常规饲养，空白对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水，期间观察小鼠精神状态、体重变化。第8天脱颈处死，剖检取附睾，称湿重，计算附睾指数。用牛鲍氏血细胞计数板计算每毫升精子数，精液涂片，伊红染色，进行精子活率测定。用流式细胞仪检测精子凋亡率，结果以av/pi表示。取单侧附睾石蜡切片，he染色，光镜观察附睾组织内细胞分布，免疫组织化学染色，观察特异性蛋白表达情况。

可行性分析：通过查找文献设计的实验方案能够在本实验室完成，实验室相关设备齐全；实验室经费支持购买实验动物、试剂等实验用品。

4. 研究创新点

现阶段对环磷酰胺对小鼠附睾影响的深入研究讨论不多，本实验运用免疫组化法对多种表面蛋白进行检测，观察环磷酰胺对小鼠附睾的影响。

5. 研究计划与进展

2018.11~12 查找课题相关文献，仔细阅读、整理文献，确定课题并设计实验

2018.12~2019.1 准备实验材料，写文献综述、开题报告

2019.2~2019.4 做实验