1. 研究目的与意义
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,在我国占全身各种恶性肿瘤7%-10%,并呈逐年上升趋势。尽管随着诊疗水平的不断提高, 近年来乳腺癌患者术后生存率有所改善,但是晚期乳腺癌的治疗效果仍不理想，其主要原因仍是肿瘤复发与转移。因此,研究乳腺癌复发与转移的机制、提高临床治疗效果成为目前肿瘤研究领域的重点。
越来越多的证据表明，肿瘤的生长、转移与血小板之间关系密切。肿瘤常导致血小板的数目和功能异常，临床发现肿瘤病人常伴有血小板增多现象，并与生存率减少有关。相反，实验研究发现减少血小板数目可抑制肿瘤转移。循环肿瘤细胞与血小板之间存在着复杂的交互作用，其相互影响作用及机制仍然不清楚，最新研究发现，肿瘤细胞可以以多种方式诱导血小板活化，进而引起一系列的级联反应，如血小板聚集、血小板脱颗粒的释放，血小板的这些功能变化反过来又促进了肿瘤转移、肿瘤血管生成进而促进肿瘤进展。因此研究肿瘤细胞与血小板之间相互作用的关系，对于靶向活化血小板而抑制肿瘤转移的治疗策略的探究意义重大。
经前期文献研究发现，不同转移能力的乳腺癌细胞对血小板活化的影响也不同，表现在血小板活化、聚集以及颗粒物分泌方面有所差异，本课题着重从肿瘤细胞对血小板的活化和聚集作用两方面研究高低转移性乳腺癌细胞（MDA-MD-231和MCF-7）对血小板活化功能的影响的差异，并在此基础上初步探索其机制，为抑制肿瘤转移的治疗和研究提供新的思路和策略。2. 文献综述
肿瘤细胞对血小板影响作用的研究进展
马冉君
（南京中医药大学 南京 210046）
3. 设计方案和技术路线
1. 选择肿瘤细胞对，进行细胞培养，血小板培养 参考前期文献后，我们选用高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231和低转移乳腺癌细胞MCF-7进行肿瘤细胞培养。 2.肿瘤细胞激活血小板 肿瘤细胞激活血小板引起血小板的活化和聚集。因此，乳腺癌细胞与血小板共孵育激活血小板后，采用流式细胞仪分析P选择素的表达，检测血小板的活化情况；采用聚集仪检测血小板的凝集率、凝集时间，检测血小板的聚集情况。 3.分析整理数据，比较高低转移肿瘤细胞对血小板活化作用的差异 4.不同肿瘤细胞对血小板的活化能力的机制探讨 肿瘤能够诱导血小板分泌特异性蛋白，因此采用ELISA、Western检测不同肿瘤细胞与血小板孵育前后分泌的MMP-2、TF、Aggrus等关键蛋白的表达差异；采用表达差异大的蛋白抑制剂进行验证。 （设计路线）见附件 |
4. 工作计划
2022.11.06 2022.12.06 查阅文献，完成综述，设计实验方案，准备实验材料；
2022.12.07 2022.01.07 学习细胞培养、血小板相关实验技术
2022.01.08 2022.01.25 选择高低转移乳腺癌细胞培养，血小板培养，共同孵育
5. 难点与创新点
本研究采用流式细胞仪、血小板聚集仪检测肿瘤诱导血小板聚集活化的情况，考察高低转移性肿瘤对血小板的聚集活化作用的差异；通过检测肿瘤诱导血小板分泌的关键蛋白考察肿瘤细胞诱导血小板活化的潜在作用机制，并选择表达差异大的蛋白抑制剂进行验证，为抑制肿瘤转移的治疗和研究提供新的思路和策略，也对乳腺癌复发与转移的机制、提高临床治疗效果具有重要的参考价值。
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