和缓艾美尔球虫1A蛋白基因的克隆表达开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义：

鸡球虫病是鸡常见且危害十分严重的寄生虫病，是艾美耳属球虫寄生于鸡肠上皮细胞所引起的寄生虫病。它造成的经济损失是惊人的^[1]。10~30日龄的雏鸡或 35~60日龄的青年鸡的发病率和致死率可高达80%。病愈的雏鸡生长受阻，增重缓慢;成年鸡一般不发病，但为带虫者，增重和产蛋能力降低，是传播球虫病的重要病源。若多种球虫混合感染，粪便中带血液，并含有大量脱落的肠粘膜。和缓艾美耳球虫是一种致病力较低的鸡的球虫病，早期研究认为，其对感染动物没有什么危害，低剂量的卵囊感染一般不会引起明显的症状^[2]。后来的研究发现，和缓艾美耳球虫虽然不引起明显的肉眼病变，但是当大量感染时，会对鸡的增重造成影响，并降低饲料的转化率^[3]。主要表现为生长缓慢，产蛋量降低，腿、喙部角质鳞片区黄色素量减少。肠表面苍白，小肠肠壁有变薄的情况，肠内容物变稀薄^[4]。长期以来，鸡球虫病的防治主要依靠药物，由于抗球虫药使用的太久，鸡球虫产生耐药性、药物残留已成为现在面临的主要问题，近年研究表明通过接种抗球虫病重组抗原或dna疫苗会刺激机体的体液和细胞免疫反应^[5]。基因工程苗和核酸疫苗，因其可诱导产生很强的免疫保护反应的优点而备受青睐。目前的研究焦点多数集中在球虫入侵的相关蛋白上，主要包括表面抗原以及各类微线体、折射体等分泌性亚细胞器抗原^[6]。因此，通过研究抗球虫病重组抗原，增强鸡的免疫原性，对更有效的防治鸡的球虫病十分重要。b本实验研究的目的1a蛋白基因是一种具有极高的保守性的伴侣蛋白。分子的质量为1300bp，是转氢酶的一部分。随着对1a蛋白基因的深入研究发现，越来越多的疾病与1a蛋白基因的表达有关。本实验旨在进一步通过对和缓艾美尔球虫1a蛋白基因的克隆和表达，验证其确实能对鸡产生一定的免疫保护作用。通过对该课题的研究，一方面锻炼了我们的实验操作，熟练掌握了实验室各种仪器的使用，为以后的学习工作打下了良好的基础。另一方面，该实验为进一步研究和缓艾美尔球虫的基因疫苗奠定基础。

国内外研究概况：

2. 研究的基本内容和问题

研究的目标：

本课题对1a蛋白基因进行克隆和表达，并对其免疫特性进行分析为进一步研究和缓艾美耳球虫的基因疫苗奠定基础。

研究的内容：

3. 研究的方法与方案

研究方法：

首先对和缓艾美耳球虫免疫性抗原基因1a蛋白基因进行克隆，随后进行原核表达重组质粒的构建，再进行融合蛋白的小量诱导表达，对表达产物进行sda-page分析，检测诱导不同时间的表达情况，对融合蛋白进行鉴定，随后进行大量表达。最后进行免疫抗原的制备，进行试验设计和免疫程序，检测重组蛋白的免疫保护效果。

技术路线：

4. 研究创新点

克隆表达出和缓艾美耳球虫1A蛋白基因，为进一步研究和缓球虫病基因疫苗提供基础。

5. 研究计划与进展

研究计划：

2016.9.7-2016.10.20：目的基因的扩增、酶切、连接及转化，将重组基因送去测序

2016.10.22-2016.11.18：小量诱导表达蛋白