PTV-8型全基因序列测定与分析开题报告

 2023-02-11 01:02

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

猪捷申病又称塔尔凡病(talfandisease)和脑脊髓炎,是由猪捷申病毒(porcineteschoviruses,ptv)引起的猪脑脊髓灰质炎、繁殖障碍、肺炎、下痢、心包炎和心肌炎、皮肤损伤及无症状等多种表现的一种病毒性传染病[1,2]。1929年该病最先发现于原捷克斯洛伐克的捷申地区,并具有高病死率(90%以上)。在过去的30多年,该病主要发生于欧洲,亚洲、北美洲及大洋洲等地区均有报道,非洲也有散发,该病的广泛传播给工业化养猪带来了巨大的经济损失[3,4]。ptv呈广泛的隐性感染状态,对外界环境的抵抗力较强,可以在猪舍中长期存在,该病毒和圆环病毒2型(ptv2)共同感染可以引起断奶仔猪的多系统衰竭综合征[2],并且易与猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv)、猪伪狂犬病毒(prv)、猪细小病毒(ppv)、口蹄疫病毒(fmdv)和猪瘟病毒(csfv)等混合感染,从而引起感染猪群出现更严重与复杂的临床症状[5]。

ptv能在猪源细胞上增殖,主要培养在原代、次代的猪肾细胞(pk)、pk-15细胞、ibrs-2细胞,bhk细胞等。病毒在单层细胞上产生细胞病变,不同毒株产生的细胞病变形态不同。主要特点为:细胞呈圆形,葡萄样聚集破碎、脱落或内部存在颗粒,周围呈星形突起。

ptv为单股正链rna,大小约7.2kb,仅含有1个完整的开放阅读框(orf)。orf编码1个多聚蛋白,多聚蛋白最终裂解为前导蛋白l,结构蛋白vp4、vp2、vp3、vp1和非结构蛋白2a、2b、2c、3a、3b、3c、3d。2003年,哈尔滨兽医研究所在我国内蒙古自治区首次分离到了猪捷申病毒swine/ch/imh/03株[6],王斌、崔尚金等[7-8]分别在我国黑龙江省和吉林省分离到了ptvjf613株和jilin/2003株,并进行了全基因组测定与分析。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标

1对一株猪捷申病毒8型进行全基因测序

2国内外分离鉴定的毒株进行同源性比较分析

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3. 研究的方法与方案

研究方法

1病毒的分离

将病毒接种于pk细胞,每日观察细胞病变(cpe)。盲传多代,收集出现细胞病变的培养物,-20℃保存。

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4. 研究创新点

此次研究使用了RT-PCR进行RNA的逆转录及cDNA的扩增,并设计了多对引物对本实验室分离的一株猪捷申病毒进行全基因测序,序列与国内外分离鉴定的毒株序列进行比较分析,以期为深入研究该病毒在我国的遗传变异与进化关系提供参考。

5. 研究计划与进展

2015年09月设计试验方案,进行试验前准备

2015年10月病毒的分离及病毒的纯化及病毒细胞半数感染量(tcid50)的测定

2015年11月rt-pcr扩增鉴定

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